ELISA試劑盒組成:
試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存
說明書1 份1 份
封板膜2 片(48)2 片(96)
密封袋1 個1 個
酶標包被板1×481×962-8℃保存
標準品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存
影響ELISA試劑盒實驗的因素
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;
2、酶結(jié)合物濃度過高,也會導(dǎo)致OD值假性增高。
二、試驗儀器
1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會使結(jié)果忽高忽低;
2、每次洗板前,應(yīng)檢查洗板機針孔有無堵塞。
三、操作
1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結(jié)果假性降低;
2、加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結(jié)果的準確性;
3、洗滌不充分,會使結(jié)果假性增高,過分洗滌呈假陰性;
4、比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高;
5、抗原與抗體反應(yīng)達到完全平衡,依賴于溫度與時間。溫度45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應(yīng)速度。
elisa試劑盒價格具有以下優(yōu)點:
1)快速: 僅需傳統(tǒng)夾心法ELISA 1/3的操作時間,1小時即可完成整個試驗流程;
2)簡單: 只需1個洗滌步驟;
3)靈活: 可單或同時檢測總蛋白及磷酸化蛋白,可在同一板上檢測不同的靶蛋白;
4)靈敏: 達到甚至超過行業(yè)標準,且結(jié)果一致性良好;
5)兼容: 常規(guī)比色法檢測,實驗室常規(guī)酶標儀讀數(shù);
Elisa試劑盒咨詢訂購方式:
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【測試種屬】犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、豬、雞鴨elisa試劑盒等種屬
【儲存方式】:2-8℃
【檢測目的】用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
【用途】科研實驗,不用于臨床診斷。
酶聯(lián)吸附測定原理
ELISA遵守以下3個核心原理:1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其學(xué)活性;2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其學(xué)和酶學(xué)活性;3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用,常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的反應(yīng),還能催化酶促反應(yīng),顯示出生物放大作用。
ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。
為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育?
ELISA屬固相測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,這是一個逐步平衡的進程,因而需經(jīng)擴散才能到達反響的結(jié)尾。在這以后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度,在建立ELISA方法作反響動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1~2小時,產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快反響,可進步反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為,在放射測定中多使反響在冰箱中過夜,以構(gòu)成多的沉淀。但因所需時刻太長,在ELISA試劑盒中一般不予選用。