PCR檢測試劑盒有效期一般為1年,這是指在適當?shù)膬Υ鏈囟认?。核酸擴增部分的試劑一般要貯存于-20℃下,產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復凍融。
產(chǎn)品名稱:核桃仁LAMP鑒定試劑盒
英文名稱:Semen juglandis
產(chǎn)品貨號:LZ-P2968
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
【結(jié)果分析條件設定】
u 基線(Baseline)設定:應選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(Start)應避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(End)應比早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設為6~15。重慶
u 閾值(Threshold)設定:將閾值線設定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的高點。
【質(zhì)控標準】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陰性,無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct;
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陽性,有明顯的指數(shù)擴增期,Ct值應小于等于35;
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 核桃仁LAMP鑒定 陽性:有明顯的指數(shù)擴增期,且Ct<38;
2.可疑:有明顯的指數(shù)擴增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復核一次,若復核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;
3. 陰性:無指數(shù)擴增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
PCR反應的特異性決定因素為:
?、僖锱c模板DNA特異正確的結(jié)合;
?、趬A基配對原則;
?、跿aq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 核桃仁LAMP試劑盒簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) PCR檢測試劑盒對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
PCR檢測步驟:
1、核桃仁LAMP試劑盒樣品處理
1)按照GB 4789.10-2016(或SN/T 1870-2016),取樣品25g(mL),加入到含有225mL 7.5% NaCl肉湯的無菌容器中均質(zhì),調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2。
2)36±1℃培養(yǎng)18-24h。
注:也可參考其他地方標準進行樣品的前處理。
2、核酸提取
1)取40μL增菌液于裂解液管中,98℃或沸水浴10min。
2)冷卻至室溫,吸取上清備用或者置于-20℃保存。
3、反應體系配置
從試劑盒中取出SA預混液,充分融化,短暫離心,然后將陰性對照、樣品的DNA提取液、陽性對照各取5μL分別加入PCR管中,蓋好管蓋,短暫離心,立即進行PCR擴增反應。
4、PCR擴增
PCR管置于PCR儀上,推薦反應程序設定如下:反應體系為25μL,在第二步每個循環(huán)60℃時檢測熒光信號,檢測通道選擇FAM。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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過氧化氫酶(CAT)試劑盒(鉬酸銨比色法)可見分光光度法
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產(chǎn)品名:過氧化氫酶,鉬酸銨比色法,可見分光光度法
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150元
產(chǎn)品名:過氧化氫酶,鉬酸銨比色法,微量法
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產(chǎn)品名:果糖含量,可見分光光度法,試劑盒
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產(chǎn)品名:過氧化氫,微量法,試劑盒
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產(chǎn)品名:果膠酯酶,試劑盒,NaOH滴定法
果糖含量試劑盒微量法
357.5元
產(chǎn)品名:果糖含量,微量法,試劑盒
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產(chǎn)品名:果膠酶,微量法,試劑盒